人转化生长因子β1试剂盒的实验步骤介绍

　　人转化生长因子β1是由391个氨基酸组成的一个TGF-β1前体分子，可被蛋白水解酶分解成多个肽片断和一个112个氨基酸的亚单位，TGF-β1前体分子包括无活性相关肽(latency-associatedpeptide,LAP)及活性TGF-β1:LAP是一个二聚肽，位于TGF-β1前体分子的N-末端;活性TGF-β1，是一个25Kd的二聚体蛋白质，由二个亚单位以二硫键相链接，位于TGF-β1的C-末端；LAP非共价性包绕TGF-β1。在体内，TGF-β1通常以无活性TGF-β1形式存在，无活性TGF-β1是一个分子量>225Kd的复合物，主要成份为一个分子量为125-210Kd的具有多个结构域的糖蛋白,称之为TGF-β1结合蛋白。

　　人转化生长因子β1试剂盒的实验步骤：

　　使用前应将试剂盒的所有组分和待检样本温度恢复到室温。强烈建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

　　1．按前述试剂准备项准备好各种试剂、标准品和待测样本。

　　2．计算检测样本所需酶标条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存。

　　3．洗板：用1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响，确保最后一次拍板没有洗液残留。

　　4．样本孵育：加入标准品和待测样本，100μL/孔，确保15分钟内完成点样，室温孵育2小时。

　　5．洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。

　　6．酶标检测抗体孵育：将预先配制至工作浓度的检测抗体加入酶标板中，100μL/孔，混匀，室温孵育1小时。

　　7．洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。

　　8．显色：将预先配制的底物液加入酶标板中，200μL/孔，混匀，室温避光孵育20分钟。

　　9．终止：加入50μL/孔终止液至酶标板中，轻轻震动酶标板至显色均匀。

　　10．读值：20分钟内读取450nm的光吸收值。