栏目导航

avigation

相关文章

elated articles

人红细胞刺激因子

简要描述:人红细胞刺激因子
血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2022-07-14
  • 访  问  量:107
产品详情在线留言
品牌自营品牌供货周期现货
应用领域化工,生物产业,能源,冶金,制药规格48T?96T
有效期6个月用途仅限于科研实验,不得用于临床
检测方法酶联免疫法样本科研实验

       人红细胞刺激因子使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本红细胞刺激因子(ESF)含量。

  试验原理:ESF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知ESF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ESF和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ESF的浓度呈比例关系。

  自备材料

  1.蒸馏水。

  2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

  3.振荡器及磁力搅拌器等。

  安全性

  1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

  2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

  3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

  操作注意事项

  1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

  2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

  3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

  4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

  5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

  6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

  7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

  8.入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

  9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

  人红细胞刺激因子的样品收集、处理及保存方法

  1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

  2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

  3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

  4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

  5、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

  试剂的准备

  1.准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

  80ng/ml(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。

  40ng/ml(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

  20ng/ml(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液

  10ng/ml(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液

  5.0ng/ml(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液

  2.5ng/ml(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液

  0ng/ml(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。

  2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

  操作步骤

  1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

  2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

  3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

  4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

  5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

  6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

  7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

  8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

  9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被V-生育酚(v-Tocopherol)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的V-生育酚(v-Tocopherol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

 

 
在线咨询
电话咨询
  • 13122629876
手机扫一扫